1.将苯酚红溶于冰乙酸，搅拌下加入溴溶于冰乙酸的溶液，搅拌几分钟后倾入60℃热水中，冷却至室温，放置过夜。过滤，依次用冰乙酸、苯洗涤滤饼，晾干，得溴酚蓝。

2.将酚红溶于冰乙酸中，加热至沸，滴加溴溶于冰乙酸中的溶液，黄色固体析出时，过滤，用乙酸洗去游离溴，置于空气中干燥后即得粗品。用冰乙酸或丙酮与冰乙酸混合溶剂重结晶，得纯品溴酚蓝。

3.将酚红和溴分别溶于醋酸中，制成溶液。先将酚红醋酸溶液加热至沸，然后在搅拌下缓慢加入溴的醋酸溶液：当酚红反应*且黄色晶体不再析出后，冷却，过滤。用少量醋酸洗去结晶中的游离溴后，用醋酸或丙酮 醋酸进行重结晶，在空气中干燥得纯品溴酚蓝。

配置溴酚蓝指示液。用途：变色范围：pH2.8-4.6（黄-蓝），酸碱指示剂；非水滴定用指示剂，蛋白电泳染色；病毒化验等 ^[3]  。

将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用。

配western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法：

0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。

加水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到*溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。溴酚蓝试纸